实验操作--重庆骨组织脱钙（EDTA慢脱）

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 在病理实验中针对骨组织或一些含钙组织制作切片时，由于硬度较大不能直接制作切片，需要脱去钙质使组织变软，方可制成切片。常用脱钙试剂有EDTA、有机酸、无机酸等，其中EDTA是一种较温和的螯合型脱钙剂，可与羟基磷灰石结晶的外层钙结合，形成可溶性的非离子化合物，同时又促进晶体内层的结合钙向外转移。借助这种连续性的作用使羟基磷灰石晶体逐渐融解，pH中性时可起螯合作用。其特点是对组织结构影响较小，经EDTA脱钙后的组织可以进行免疫组化/荧光、重庆原位杂交等检测，该法脱钙速度较缓慢，脱钙周期相对较长，一般需要数周至数月（具体与脱钙组织大小有关）。

  脱钙步骤： 组织取材后将置于足量的重庆4%多聚甲醛固定液中固定24 h以上，然后放入重庆EDTA脱钙液中，脱钙液的体积应为组织体积的15-20倍。脱钙期间每隔2-3天更换新鲜的脱钙液，直到物理法检测合适，即为脱钙终点。

EDTA脱钙注意事项

1、 厚度5mm左右的骨组织块脱钙时间一般在24h左右即可。

2、 适当加温能加快脱钙的速度，一般不应超过37～40℃，温度过高容易使骨组织造成松散解体，尤其不可大于60℃。

3、 脱钙应彻底，防止脱钙不足或过度。脱钙程度应控制在不影响组织切片的同时尽量缩短脱钙时间，以免脱钙过长引起组织损害。

4、 脱钙用具避免使用金属容器，尽量使用玻璃容器。

5、 骨组织脱钙应先固定后脱钙或脱钙固定同时进行，不应先脱钙后固定。

6、 每隔一段时间检测一次脱钙程度，脱钙过度会增加组织的损伤程度，影响染色结果。

7、 脱钙终点的测定(物理法)：采用针刺、手掐、钳夹等方法，当骨组织变软或针刺时没有阻力感即可终止脱钙。物理检测法会对组织结构有一定的损害， 尽量避免用力过大或反复检测。 

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